HLA-DRβ5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402985-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HLA-DRβ5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HLA-DRβ5 Double Nickase Plasmid (h) e il HLA-DRβ5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HLA-DRB5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HLA-DRβ5 Antibody (4D12): sc-53889
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HLA-DRβ5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-DRβ5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DRB5 codifica la catena β5 di HLA-DR, una componente polimorfica degli eterodimeri di MHC di classe II che presentano ai linfociti T CD4+ peptidi derivati dall’ambiente extracellulare. Assemblandosi con HLA-DRA nelle cellule presentanti l’antigene, HLA-DRβ5 contribuisce al caricamento dei peptidi negli endosomi, alla formazione della sinapsi immunologica e ai programmi di attivazione a valle dei linfociti T che modellano le risposte immunitarie adattative. Le variazioni nelle tasche di legame dei peptidi dell’MHC di classe II influenzano il repertorio antigenico e la tolleranza immunitaria, collegando i loci HLA-DR alla suscettibilità e alla stratificazione in molteplici contesti di malattie immunomediate e infiammatorie. HLA-DRB5 è quindi ampiamente studiato nella biologia della presentazione dell’antigene, nella mappatura degli aplogruppi HLA e nei meccanismi che regolano la comunicazione tra cellule presentanti l’antigene e linfociti T.
HLA-DRβ5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HLA-DRB5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HLA-DRB5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HLA-DRB5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HLA-DRB5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.