HLA-DRβ5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402985-ACT

HLA-DRB5 codifica la catena HLA-DRβ5, che si associa a HLA-DRA per formare eterodimeri HLA-DR di classe II dell’MHC, i quali presentano ai linfociti T CD4+ peptidi derivati dall’ambiente extracellulare. Questo programma di presentazione dell’antigene è centrale per l’attivazione dell’immunità adattativa, la selezione timica e la tolleranza immunitaria periferica, ed è regolato dal transattivatore di classe II (CIITA) e da reti trascrizionali sensibili all’interferone-γ. L’espressione di HLA-DRB5 è più marcata nelle cellule presentanti l’antigene professionali e può essere indotta in altri tipi cellulari durante l’infiammazione, influenzando il priming dei linfociti T e gli esiti della segnalazione citochinica. Le variazioni negli aplotipi HLA di classe II e l’espressione deregolata di MHC II sono ampiamente studiate nel contesto dell’autoimmunità, dell’immunobiologia dei trapianti e dei microambienti immunitari tumorali.

HLA-DRβ5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-DRB5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-DRβ5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-DRB5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-DRB5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-DRβ5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-DRB5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-DRβ5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-DRβ5 nelle cellule tumorali con espressione di HLA-DRB5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.