HLA-DRβ1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406727-ACT

HLA-DRB1 codifica la catena β del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe II HLA-DR, formando un recettore eterodimerico che presenta ai linfociti T CD4+ peptidi derivati da antigeni extracellulari. Regolando l’elaborazione e la presentazione dell’antigene, HLA-DRβ1 contribuisce a modellare l’innesco dei linfociti T, la tolleranza periferica e la dinamica delle reti immunitarie guidate dalle citochine nelle cellule presentanti l’antigene professionali. Le variazioni in HLA-DRB1 influenzano la specificità di legame dei peptidi e modificano il riconoscimento immunitario, collegando questo locus alla suscettibilità e alla gravità di numerose malattie immuno-mediate e infiammatorie. In quanto nodo centrale dell’immunità adattativa, HLA-DRβ1 è spesso studiato in contesti quali la presentazione di autoantigeni, la risposta ai patogeni e la stratificazione immunogenetica.

HLA-DRβ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-DRB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-DRβ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-DRB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-DRB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-DRβ1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-DRB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-DRβ1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-DRβ1 nelle cellule tumorali con espressione di HLA-DRB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.