HLA-DP β1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401413-ACT

HLA-DPB1 codifica la catena β1 di HLA-DP, un componente fondamentale degli eterodimeri dell’MHC di classe II che presentano ai linfociti T CD4+ peptidi derivati da antigeni extracellulari e contribuiscono a definire il riconoscimento immunitario adattativo. L’espressione è concentrata nelle cellule presentanti l’antigene professionali ed è regolata da programmi guidati da citochine, inclusa la trascrizione responsiva all’interferone-γ, a supporto delle vie di processamento e presentazione dell’antigene e dell’innesco (priming) delle cellule T. La variabilità degli alleli di HLA-DPB1 influenza i repertori di legame dei peptidi e la reattività immunitaria, collegando questo locus a differenze di suscettibilità ed esiti nelle condizioni autoimmuni e infiammatorie, nelle risposte alle malattie infettive e nell’allo-reattività correlata ai trapianti. Come parte della regione HLA di classe II, HLA-DP β1 funge anche da importante marcatore per analizzare i meccanismi di presentazione dell’antigene e le associazioni immunogenetiche nella biologia del sistema immunitario umano.

HLA-DP β1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-DPB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-DP β1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-DPB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-DPB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-DP β1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-DPB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-DP β1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-DP β1 nelle cellule tumorali con espressione di HLA-DPB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.