HLA-DOβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420773

Panoramica

H2-Ob codifica l’ortologo murino di HLA-DOβ, una proteina non classica associata all’MHC di classe II che forma un eterodimero con DOα nelle cellule presentanti l’antigene. Questo complesso si localizza in compartimenti endosomiali tardivi/lisosomiali e modula il caricamento dei peptidi sull’MHC di classe II regolando l’attività di HLA-DM/H2-DM, plasmando così il repertorio di peptidi presentati alle cellule T CD4+. Attraverso la sua influenza sull’elaborazione endosomiale dell’antigene e sul traffico dell’MHC II, H2-Ob contribuisce alla tolleranza immunitaria, all’attivazione dell’immunità adattativa e alla qualità delle risposte umorali. Uno squilibrio nella regolazione DO/DM e un’alterata presentazione antigenica tramite MHC II sono aspetti rilevanti negli studi su autoimmunità, infezioni e meccanismi di malattie infiammatorie in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene H2-Ob in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del H2-Ob insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto H2-Ob a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HLA-DOβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di H2-Ob per lo studio della segnalazione di HLA-DOβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni H2-Ob critici per la funzione di HLA-DOβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di H2-Ob per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus H2-Ob. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HLA-DOβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HLA-DOβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia H2-Ob per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio H2-Ob definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.