HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420773

Übersicht

H2-Ob kodiert das Maus-Ortholog von HLA-DOβ, einem nichtklassischen MHC‑Klasse‑II‑assoziierten Protein, das in antigenpräsentierenden Zellen ein Heterodimer mit DOα bildet. Dieser Komplex lokalisiert in späte endosomale/lysosomale Kompartimente und moduliert die Peptidbeladung von MHC‑Klasse II, indem er die Aktivität von HLA‑DM/H2‑DM reguliert und so das Repertoire der den CD4+‑T‑Zellen präsentierten Peptide mitprägt. Über seinen Einfluss auf die endosomale Antigenverarbeitung und das MHC‑II‑Trafficking trägt H2‑Ob zu Immuntoleranz, adaptiver Immunaktivierung und zur Qualität humoraler Antworten bei. Eine dysregulierte DO/DM‑Balance und eine veränderte MHC‑II‑Antigenpräsentation sind für Studien zu Autoimmunität, Infektionen und Mechanismen entzündlicher Erkrankungen in Mausmodellen relevant.

Das HLA-DOβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des H2-Ob-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des H2-Ob-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von H2-Ob nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HLA-DOβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von H2-Ob-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HLA-DOβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf H2-Ob-Exone abzielen, die für die HLA-DOβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere H2-Ob-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HLA-DOβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HLA-DOβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des H2-Ob-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HLA-DOβ HDR-Plasmid (m) und HLA-DOβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von H2-Ob-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten H2-Ob-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.