HLA-A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400294-ACT

HLA-A codifica una catena pesante classica dell’MHC di classe I che si associa alla β2-microglobulina per presentare ai linfociti T CD8+ peptidi di origine endogena, plasmando la sorveglianza immunitaria e le risposte citotossiche specifiche per l’antigene. La sua espressione e il repertorio peptidico integrano segnali della via di processamento e presentazione dell’antigene, inclusi il processamento proteasomiale, il trasporto dei peptidi dipendente da TAP e il caricamento nel reticolo endoplasmatico, e sono modulati dal segnale JAK/STAT indotto dagli interferoni. La variabilità di HLA-A influenza l’alloriconoscimento e la compatibilità immunitaria ed è ampiamente studiata nei contesti delle infezioni, dell’immunologia tumorale e delle malattie autoimmuni, in cui la presentazione dell’antigene e l’evasione immunitaria sono processi biologici chiave.

HLA-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-A nelle cellule tumorali con espressione di HLA-A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.