Histone H2A.Z Double Nickase Plasmid (m): sc-424549-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Histone H2A.Z Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Histone H2A.Z Double-Nickase-Plasmid (m) und Histone H2A.Z Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf H2afz abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Histone H2A.Z Double Nickase Plasmid (m) | sc-424549-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Histone H2A.Z Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424549-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2afz kodiert die Histonvariante H2A.Z, eine zentrale Komponente des Chromatins, die das kanonische H2A innerhalb von Nukleosomen ersetzt und so die Chromatinzugänglichkeit sowie die Transkriptionsantwort moduliert. H2A.Z ist an der Regulation von Promotoren und Enhancern, an der Funktion von Boundary-Elementen und an der Kopplung des Chromatinzustands an Prozesse wie DNA-Replikation, DNA-Schadenssignalgebung und Zellzyklusprogression beteiligt. Über seine Effekte auf die Nukleosomenstabilität und die Rekrutierung von Chromatin-Remodelern beeinflusst H2A.Z die Linienspezifikation und stressinduzierte Genprogramme. Eine dysregulierte Ablagerung oder ein veränderter Turnover von H2A.Z wurde mit veränderten epigenetischen Landschaften in der Krebsbiologie sowie mit inflammatorischen oder entwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und ist daher für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle relevant.
Histone H2A.Z Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des H2afz-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von H2afz abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die H2afz-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit H2afz-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.