Histone H2A.Z Plasmide Double Nickase (m): sc-424549-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Histone H2A.Z Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Histone H2A.Z Double Nickase Plasmid (m) e il Histone H2A.Z Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira H2afz. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Histone H2A.Z Plasmide Double Nickase (m) | sc-424549-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Histone H2A.Z Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424549-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2afz codifica la variante istonica H2A.Z, un componente fondamentale della cromatina che sostituisce l’H2A canonica all’interno dei nucleosomi per modulare l’accessibilità della cromatina e la reattività trascrizionale. H2A.Z partecipa alla regolazione di promotori ed enhancer, alla funzione degli elementi di confine e all’accoppiamento dello stato della cromatina con processi quali la replicazione del DNA, la segnalazione del danno al DNA e la progressione del ciclo cellulare. Attraverso i suoi effetti sulla stabilità dei nucleosomi e sul reclutamento di rimodellatori della cromatina, H2A.Z influenza la specificazione di linea e i programmi genici indotti dallo stress. Una deposizione o un turnover alterati di H2A.Z sono stati associati a cambiamenti del paesaggio epigenetico osservati nella biologia del cancro e in fenotipi infiammatori o dello sviluppo, rendendolo rilevante per studi meccanicistici del controllo trascrizionale.
Histone H2A.Z Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus H2afz nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di H2afz. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di H2afz. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con H2afz interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.