Histone H1X Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411232-ACT

H1FX codifica l’istone H1X, una variante dell’istone linker che si lega al DNA nucleosomiale e contribuisce alla compattazione della cromatina di ordine superiore e all’organizzazione del genoma. Modulando la spaziatura dei nucleosomi e l’accessibilità della cromatina, l’istone H1X influenza la regolazione trascrizionale, la tempistica della replicazione del DNA e le risposte al danno al DNA attraverso vie di rimodellamento della cromatina. Un’espressione alterata di H1FX o uno squilibrio tra le varianti dell’istone H1 è stato associato a una deregolazione epigenetica che può influire sulle transizioni di stato cellulare, sui programmi di proliferazione e sulla stabilità del genoma. Queste caratteristiche rendono H1FX un bersaglio utile per studiare l’architettura della cromatina, le reti trascrizionali e i meccanismi epigenetici rilevanti per la malattia nelle cellule umane.

Histone H1X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di H1FX senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Histone H1X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus H1FX nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione H1FX, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Histone H1X. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus H1FX nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Histone H1X nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Histone H1X nelle cellule tumorali con espressione di H1FX silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.