Histone Deacetylase 8 (HDAC8) Plasmide Double Nickase (h): sc-400757-NIC

HDAC8 codifica l’istone deacetilasi 8, una deacetilasi di classe I dipendente da Zn2+ che rimuove gruppi acetile dai residui di lisina sugli istoni e su altre proteine nucleari, modulando l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. Attraverso la regolazione delle dinamiche di acetilazione, HDAC8 contribuisce al controllo epigenetico della progressione del ciclo cellulare, dei programmi di differenziamento e dell’espressione genica in risposta al danno al DNA. L’attività di HDAC8 si interseca con il rimodellamento della cromatina e con reti di repressione/attivazione trascrizionale che coordinano i percorsi di sviluppo e di risposta allo stress. Un’espressione o una funzione disregolata di HDAC8 è stata associata a stati epigenetici alterati osservati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, a supporto del suo impiego come bersaglio per studi meccanicistici della regolazione genica.

Histone Deacetylase 8 (HDAC8) Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HDAC8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HDAC8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HDAC8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HDAC8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.