Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420820-LAC

Hdac6 codifica l’istone deacetilasi 6 (HDAC6), una deacetilasi prevalentemente citoplasmatica che regola l’acetilazione di substrati non istonici, tra cui α-tubulina, HSP90 e cortactina, influenzando così la dinamica dei microtubuli, l’attività dei chaperoni e il rimodellamento dell’actina. Attraverso queste funzioni, HDAC6 coordina processi chiave quali l’autofagia e la rimozione di proteine mal ripiegate mediata dagli aggresomi, il traffico intracellulare e la segnalazione della risposta allo stress. L’attività di HDAC6 interseca le vie della proteostasi che coinvolgono il controllo di qualità ubiquitina-dipendente e può modulare la segnalazione infiammatoria e i programmi di motilità cellulare. Reti associate a HDAC6 deregolate sono state collegate a modelli di neurodegenerazione, a fenotipi associati al cancro e a patologie immuno-mediate, a supporto della sua ampia utilità negli studi meccanicistici.

Le particelle di attivazione lentivirale Histone Deacetylase 6 (HDAC6) (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Hdac6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Histone Deacetylase 6 (HDAC6) (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Hdac6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Histone Deacetylase 6 (HDAC6). L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Hdac6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.