Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Plasmide Double Nickase (m): sc-420819-NIC

Hdac5 codifica l’istone deacetilasi 5 (HDAC5), una HDAC di classe IIa che funge da regolatore della cromatina sensibile ai segnali, coordinando programmi trascrizionali che governano differenziamento, metabolismo e adattamento allo stress. HDAC5 trasloca tra nucleo e citoplasma in risposta alla fosforilazione da parte di chinasi come CaMK e AMPK, integrando i segnali del calcio e dello stato energetico con il controllo epigenetico dell’espressione genica. Attraverso interazioni con fattori di trascrizione, tra cui MEF2, modula reti geniche neuronali e muscolari e contribuisce al rimodellamento trascrizionale dipendente dall’attività. Un’attività deregolata di HDAC5 è stata associata ad alterazioni della segnalazione infiammatoria, al rimodellamento del muscolo cardiaco e scheletrico e a fenotipi neurocomportamentali, a supporto della sua rilevanza in modelli di malattie cardiometaboliche e del neurosviluppo.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hdac5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hdac5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hdac5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hdac5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.