Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Plasmide Double Nickase (m): sc-420818-NIC

Hdac3 codifica per l’istone deacetilasi 3 (HDAC3), una deacetilasi istonica di classe I che funge da nucleo catalitico dei complessi corepressori NCoR/SMRT e regola l’accessibilità della cromatina attraverso la deacetilazione delle lisine. Nelle cellule di topo, HDAC3 coordina programmi di repressione trascrizionale legati al controllo del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e all’omeostasi metabolica, integrando segnali provenienti dai recettori nucleari e dalle vie infiammatorie. Rimodellando gli stati epigenetici, HDAC3 influenza l’impegno di linea e l’espressione genica specifica di tessuto; la sua alterazione è associata a proliferazione deregolata e a fenotipi immunitari e metabolici modificati. Queste funzioni rendono Hdac3 un bersaglio ampiamente utilizzato per studiare i meccanismi dipendenti dalla cromatina alla base di programmi trascrizionali rilevanti per il cancro, dell’infiammazione e della biologia delle malattie metaboliche.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hdac3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hdac3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hdac3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hdac3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.