Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400446-ACT

L’istone deacetilasi 3 (HDAC3) è una HDAC di classe I che costituisce il nucleo dell’attività catalitica all’interno dei complessi corepressori NCoR/SMRT, rimuovendo gruppi acetile dalle code istoniche e da specifici substrati non istonici, modulando così l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. Attraverso il controllo epigenetico degli stati di enhancer e promotori, HDAC3 contribuisce alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno del DNA e alla differenziazione specifica di linea, integrando inoltre segnali che influenzano l’espressione genica legata al metabolismo e all’infiammazione. Un’alterazione dell’attività o del reclutamento di HDAC3 è stata implicata in una repressione trascrizionale aberrante in molteplici contesti patologici, inclusi tumori e disturbi neuroevolutivi e immuno-correlati, in cui la modificazione dell’acetilazione della cromatina è una caratteristica molecolare ricorrente. In quanto regolatore epigenetico nodale, HDAC3 è spesso studiata per il suo impatto sulle reti trascrizionali, sul rimodellamento della cromatina e sul controllo dipendente dal contesto dell’identità cellulare.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HDAC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HDAC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HDAC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Histone Deacetylase 3 (HDAC3). A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HDAC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Histone Deacetylase 3 (HDAC3) nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Histone Deacetylase 3 (HDAC3) nelle cellule tumorali con espressione di HDAC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.