Histone Deacetylase 10 (HDAC10) Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403221-ACT

HDAC10 codifica l’istone deacetilasi 10, una deacetilasi zinco-dipendente della famiglia delle HDAC di classe II che modula lo stato di acetilazione di substrati istonici e non istonici, contribuendo a determinare l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. HDAC10 è stata collegata alla regolazione dell’autofagia e di processi associati ai lisosomi e contribuisce a vie di omeostasi cellulare che influenzano proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. Attraverso il controllo epigenetico dell’espressione genica, l’attività di HDAC10 interseca reti che governano la stabilità del genoma e la segnalazione infiammatoria. Un’espressione o una funzione deregolata di HDAC10 è stata associata ad alterazioni del fenotipo delle cellule tumorali e ad altri stati trascrizionali rilevanti per la malattia, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sulla regolazione epigenetica.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HDAC10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HDAC10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HDAC10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Histone Deacetylase 10 (HDAC10). A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HDAC10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Histone Deacetylase 10 (HDAC10) nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Histone Deacetylase 10 (HDAC10) nelle cellule tumorali con espressione di HDAC10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.