HIG2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403510-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HIG2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HIG2 Double Nickase Plasmid (h) e il HIG2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HILPDA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HIG2 Antibody (G-2): sc-376704
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HIG2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403510-NIC | 20 µg | $410.00 |
HILPDA codifica la proteina associata alle goccioline lipidiche inducibile dall’ipossia (HIG2), una piccola proteina che si localizza nelle goccioline lipidiche ed è fortemente indotta dall’ipossia e da segnali infiammatori. HIG2 supporta l’adattamento cellulare a basse concentrazioni di ossigeno promuovendo l’accumulo di lipidi neutri e rimodellando la gestione degli acidi grassi, collegando la segnalazione mediata da HIF alla biogenesi delle goccioline lipidiche e alle risposte allo stress metabolico. Questa biologia si interseca con vie che controllano la tolleranza allo stress ossidativo, la carenza di nutrienti e l’attivazione dell’immunità innata, rendendo HILPDA un nodo utile per studiare la riprogrammazione metabolica guidata dall’ipossia. Un’alterata espressione di HILPDA è stata riportata in contesti di ipossia tumorale, polarizzazione dei macrofagi e infiammazione associata a malattie metaboliche, in cui la dinamica delle goccioline lipidiche può influenzare lo stato cellulare e i programmi di sopravvivenza.
HIG2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HILPDA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HILPDA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HILPDA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HILPDA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.