Plasmide CRISPR d'Activation (h) HIG2: sc-403510-ACT

Le gène humain **HILPDA** code la **protéine associée aux gouttelettes lipidiques induite par l’hypoxie** (HIG2), un petit facteur de réponse au stress qui se localise aux gouttelettes lipidiques et intervient dans le remodelage métabolique en conditions de faible oxygénation et de limitation en nutriments. HIG2 est induite en aval de la signalisation HIF et contribue à la régulation du stockage et de l’utilisation des lipides intracellulaires, en influençant le contrôle de la lipolyse et la gestion des acides gras lors de l’adaptation à l’hypoxie. Par ces mécanismes, HILPDA/HIG2 est pertinente pour les voies qui relient l’hypoxie, le métabolisme lipidique et les réponses inflammatoires ou au stress métabolique. Une expression dérégulée a été associée à des affections caractérisées par une altération de la tension en oxygène et une reprogrammation lipidique, ce qui appuie son utilisation comme nœud mécanistique pour l’étude de phénotypes métaboliques pertinents pour les maladies.

HIG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HILPDA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HIG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HILPDA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HILPDA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HIG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HILPDA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HIG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HIG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HILPDA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.