HIF1a Plasmide Double Nickase (h): sc-400036-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HIF1a Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HIF1a Double Nickase Plasmid (h) e il HIF1a Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HIF1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HIF1a Antibody (28b): sc-13515
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HIF1a Plasmide Double Nickase (h) | sc-400036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIF1a Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HIF1A codifica per il fattore inducibile dall’ipossia 1α (HIF1α), un fattore di trascrizione centrale per il rilevamento dell’ossigeno che si accumula in condizioni di bassa disponibilità di ossigeno e attiva programmi genici adattativi che controllano glicolisi, angiogenesi, eritropoiesi e sopravvivenza cellulare. Una volta stabilizzato, HIF1α forma un eterodimero con ARNT (HIF1β) e si lega agli elementi di risposta all’ipossia per regolare bersagli quali VEGFA, SLC2A1 e LDHA, integrando segnali provenienti da PI3K–AKT–mTOR, MAPK e dalle ROS mitocondriali. In normossia, l’idrossilazione delle prolina promuove l’ubiquitinazione mediata da VHL e la degradazione proteasomiale, collegando la disponibilità di ossigeno all’output trascrizionale. Un’attività deregolata di HIF1A/HIF1α è implicata nella biologia dell’ipossia tumorale, nelle risposte allo stress legate all’ischemia, nell’infiammazione e nella riprogrammazione metabolica, rendendolo ampiamente utilizzato nella ricerca su vie di segnalazione e modelli di malattia.
HIF1a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HIF1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HIF1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HIF1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HIF1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.