Particules Lentivirales d'Activation (h) HIF PHD3: sc-403671-LAC

EGLN3 code la protéine 3 contenant un domaine prolyl-hydroxylase (HIF PHD3), une dioxygénase sensible à l’oxygène qui hydroxyle les sous-unités HIF-α afin de favoriser leur ubiquitinylation dépendante de VHL et leur dégradation par le protéasome en conditions normoxiques. En modulant la stabilité de HIF, PHD3 régule des programmes transcriptionnels sensibles à l’hypoxie qui gouvernent l’angiogenèse, le métabolisme glycolytique, l’érythropoïèse et la survie cellulaire, et elle est impliquée dans des mécanismes de rétrocontrôle au sein de la voie cellulaire de l’hypoxie. L’activité d’EGLN3 est influencée par la pression partielle d’oxygène, le fer et la disponibilité en 2‑oxoglutarate, ce qui intègre l’état métabolique à l’adaptation transcriptionnelle. Une dérégulation de la signalisation EGLN3/HIF a été associée à divers contextes, notamment l’hypoxie tumorale, la biologie de l’ischémie‑reperfusion et les microenvironnements inflammatoires, ce qui soutient des études mécanistiques sur la signalisation dépendante de l’oxygène.

Les particules d'activation lentivirales HIF PHD3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EGLN3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HIF PHD3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EGLN3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HIF PHD3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EGLN3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.