HGFA Plasmide Double Nickase (h): sc-404422-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HGFA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HGFA Double Nickase Plasmid (h) e il HGFA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HGFAC. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HGFA Antibody (B-6): sc-515126
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HGFA Plasmide Double Nickase (h) | sc-404422-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HGFA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404422-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HGFAC codifica per l’attivatore del fattore di crescita degli epatociti (HGFA), una serin-proteasi secreta che converte la pro-HGF a catena singola in HGF attivo, potenziando così la segnalazione del recettore MET. Questo passaggio proteolitico collega le reti extracellulari di proteasi alle vie a valle che controllano le interazioni epitelio–mesenchima, la motilità cellulare, la proliferazione e il rimodellamento tissutale, con crosstalk con le cascate associate a coagulazione e fibrinolisi. Un’attività deregolata dell’asse HGF/HGFA–MET è stata implicata in un’anomala segnalazione stroma–epitelio, in programmi di crescita invasiva e in risposte rigenerative alterate, rendendo HGFAC un nodo utile per studi meccanicistici sulla proteolisi pericellulare e sull’attivazione dei fattori di crescita nelle cellule umane.
HGFA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HGFAC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HGFAC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HGFAC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HGFAC interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.