HGF Plasmide Double Nickase (h): sc-400433-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HGF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HGF Double Nickase Plasmid (h) e il HGF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HGF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HGFα Antibody (H-10): sc-374422
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HGF Plasmide Double Nickase (h) | sc-400433-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HGF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400433-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore di crescita degli epatociti (HGF) codifica una citochina pleiotropica secreta che funge da ligando ad alta affinità per il recettore tirosin-chinasico MET. La segnalazione HGF–MET attiva le vie PI3K–AKT, RAS–MAPK, STAT e quelle dipendenti dalle adesioni focali per regolare sopravvivenza, proliferazione, motilità, morfogenesi e interazioni epitelio–mesenchimali. Nei contesti di danno tissutale, HGF contribuisce a programmi rigenerativi e al crosstalk stroma–epitelio che modulano il rimodellamento della matrice extracellulare e le risposte angiogeniche. Un’espressione deregolata di HGF o un’attività aberrante della via MET sono associate a invasione oncogena e metastatizzazione, rimodellamento fibrotico e patologie legate all’infiammazione, rendendo HGF un bersaglio frequente negli studi meccanicistici sulla segnalazione del microambiente.
HGF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HGF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HGF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HGF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HGF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.