HGFα/β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420849
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HGFα/β Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HGFα/β, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HGFα Antibody (H-10): sc-374422
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HGFα/β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420849 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene Hgf del topo codifica il fattore di crescita degli epatociti (HGFα/β), un ligando eterodimerico secreto del recettore tirosin-chinasico MET che coordina la segnalazione epitelio–mesenchimale. L’attivazione dell’asse HGF–MET coinvolge le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT, STAT e delle Rho GTPasi per regolare proliferazione, sopravvivenza, motilità, morfogenesi e riparazione tissutale. In vivo e in vitro, la segnalazione di HGF modella lo sviluppo e la rigenerazione degli organi e modula il crosstalk stroma–epitelio all’interno del microambiente. La disregolazione della segnalazione HGF/MET è ampiamente studiata in modelli di fibrosi, infiammazione e progressione tumorale, inclusi invasione, programmi angiogenici e disseminazione metastatica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HGFα/β (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hgf in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hgf insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hgf a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HGFα/β.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hgf per lo studio della segnalazione di HGFα/β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Hgf critici per la funzione di HGFα/β
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hgf per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HGFα/β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HGFα/β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hgf. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HGFα/β Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HGFα/β (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hgf per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hgf definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.