Hex Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420852

Panoramica

Hhex (Hex) è un fattore di trascrizione homeobox che regola il patterning embrionale precoce e l’organogenesi, con funzioni di rilievo nella specificazione dell’endoderma anteriore e nello sviluppo delle linee cellulari di fegato, pancreas e tiroide nel topo. Legandosi al DNA tramite il suo omeodominio, Hex integra segnali di sviluppo per controllare programmi di espressione genica che influenzano le decisioni di destino cellulare, la morfogenesi e la differenziazione dei tessuti. L’attività di Hhex interseca vie che governano lo sviluppo endodermico e vascolare ed è stata collegata alla regolazione di reti geniche ematopoietiche ed endoteliali. Un’espressione o una funzione deregolata di Hhex è associata ad anomalie dello sviluppo ed è stata implicata in stati di differenziazione alterati rilevanti per la biologia del cancro e per modelli di malattie ematologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hex (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hhex in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hhex insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hhex a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hex.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hhex per lo studio della segnalazione di Hex, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hhex critici per la funzione di Hex
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hhex per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hex CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hex CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hhex. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hex Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hex (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hhex per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hhex definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.