Plasmide CRISPR/Cas9 KO HES7 (h): sc-407096

Présentation

HES7 (hairy and enhancer of split 7) code un répresseur transcriptionnel bHLH qui constitue un composant central de l’horloge de segmentation au cours du développement embryonnaire humain. Il agit en aval de la signalisation Notch et intègre des programmes d’expression génique oscillatoires qui coordonnent la somitogenèse, avec une régulation stricte de la temporalité transcriptionnelle et des dynamiques de rétrocontrôle négatif. Une activité altérée de HES7 perturbe l’organisation des somites et a été associée à des anomalies congénitales de segmentation vertébrale, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude des réseaux de régulation génique du développement. Dans des modèles cellulaires, HES7 est fréquemment étudié pour ses rôles dans la répression transcriptionnelle, les interactions avec la voie Notch et les mécanismes de contrôle de l’expression rythmique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HES7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HES7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HES7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HES7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HES7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HES7 pour l'étude de la signalisation de HES7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HES7 essentiels à la fonction de HES7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HES7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HES7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HES7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HES7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HES7 plasmide HDR (h) et le HES7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HES7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HES7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.