HES1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400387-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HES1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HES1 Double Nickase Plasmid (h) e il HES1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HES1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HES1 Antibody (E-5): sc-166410
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HES1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400387-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HES1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400387-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HES1 codifica un repressore trascrizionale della famiglia basic helix-loop-helix (bHLH) che agisce come effettore canonico a valle della segnalazione Notch, dove attenua i programmi trascrizionali specifici di linea per mantenere gli stati progenitori. Legandosi a motivi N-box/E-box e reclutando complessi corepressori, HES1 contribuisce a coordinare il controllo del ciclo cellulare, la tempistica della differenziazione e la strutturazione dei tessuti in contesti neurali, endocrini ed ematopoietici. L’attività di HES1 si integra con vie come Wnt, Hedgehog e TGF-β per modulare le decisioni di destino cellulare e le dinamiche trascrizionali oscillanti durante lo sviluppo. Un’espressione deregolata di HES1 o un’alterazione dell’attività dell’asse Notch–HES1 è stata associata a programmi anomali di differenziazione e proliferazione osservati in diversi modelli rilevanti per la malattia, inclusi disordini dello sviluppo e contesti di segnalazione oncogenica.
HES1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HES1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HES1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HES1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HES1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.