Heme Oxygenase 1/HMOX1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400157-NIC

HMOX1 codifica l'eme ossigenasi 1 (HO-1), un enzima inducibile associato al reticolo endoplasmatico (RE) che catalizza la degradazione dell'eme in biliverdina, ferro libero e monossido di carbonio, collegando il turnover dell'eme all'omeostasi redox cellulare. HO-1 è un effettore centrale della risposta allo stress ossidativo e si integra con la segnalazione NRF2/KEAP1, con le vie di gestione del ferro e con mediatori infiammatori per modulare la citoprotezione, la funzione mitocondriale e le decisioni sul destino cellulare. Un'alterata regolazione di HMOX1 è stata associata a una segnalazione delle specie reattive dell'ossigeno (ROS) deregolata, a un sequestro del ferro compromesso e a cambiamenti nelle risposte guidate dalle citochine. Questi processi sono spesso studiati in contesti quali la biologia vascolare, la neuroinfiammazione, lo stress metabolico e il rimodellamento del microambiente tumorale, dove il metabolismo dell'eme e lo stress ossidativo sono variabili chiave.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HMOX1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HMOX1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HMOX1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HMOX1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.