HEL308 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404447-ACT

HELQ codifica a helicase humana de DNA HEL308, uma helicase SF2 dependente de ATP que ajuda a resolver intermediários de replicação do DNA bloqueados e promove a estabilidade do genoma durante o estresse replicativo. A HEL308 participa de vias ligadas ao reparo do DNA e ao processamento da forquilha de replicação, incluindo mecanismos que se conectam à recombinação homóloga e à rede da anemia de Fanconi para tolerância a ligações cruzadas intercadeias. Ao sustentar a replicação precisa do DNA e a sinalização de resposta a danos, a HELQ influencia desfechos celulares como a ativação de checkpoints, a integridade cromossômica e a sobrevivência sob estresse genotóxico. Função ou expressão alteradas de HELQ têm sido associadas na literatura a fenótipos de instabilidade genômica e a contextos de suscetibilidade relevantes para a biologia do câncer e para distúrbios associados ao reparo do DNA.

HEL308 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HELQ sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HEL308 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HELQ em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HELQ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HEL308. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HELQ nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HEL308 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HEL308 em células tumorais com expressão de HELQ silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.