HEATR6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412958-ACT

HEATR6 codifica una proteina contenente ripetizioni HEAT, che si prevede funzioni da impalcatura per complessi proteici macromolecolari, sostenendo l’organizzazione spaziale di fattori di segnalazione e regolatori nel citoplasma e nel nucleo. Le proteine arricchite in ripetizioni HEAT partecipano spesso al trasporto nucleocitoplasmatico, all’assemblaggio di ribonucleoproteine e alla modulazione dei programmi trascrizionali coordinando interazioni multiproteiche. Sebbene HEATR6 rimanga caratterizzata in modo incompleto, la sua architettura di domini suggerisce potenziali ruoli nella proteostasi e nella regolazione dello stato cellulare, processi spesso alterati in contesti di proliferazione e risposta allo stress. La disregolazione delle reti legate a impalcatura e trasporto è rilevante per studi sulla stabilità del genoma, sul metabolismo dell’RNA e su cambiamenti associati a malattia nel controllo trascrizionale.

HEATR6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HEATR6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HEATR6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HEATR6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HEATR6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HEATR6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HEATR6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HEATR6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HEATR6 nelle cellule tumorali con espressione di HEATR6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.