HCN2 Plasmide Double Nickase (h): sc-405074-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HCN2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HCN2 Double Nickase Plasmid (h) e il HCN2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HCN2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HCN2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405074-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HCN2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405074-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HCN2 codifica il canale 2 attivato dall’iperpolarizzazione e regolato da nucleotidi ciclici (hyperpolarization-activated cyclic nucleotide–gated channel 2), un canale ionico di membrana che trasporta la corrente Ih/If e contribuisce all’attività pacemaker e all’eccitabilità ritmica nei neuroni e nei tessuti del sistema di conduzione cardiaco. L’apertura del canale è innescata dall’iperpolarizzazione di membrana ed è modulata dal cAMP intracellulare, collegando HCN2 alla segnalazione GPCR–adenilato ciclasi e al controllo dell’attività dipendente del potenziale di membrana. Modulando il potenziale di riposo, la resistenza d’ingresso e la scarica di rimbalzo (rebound), HCN2 influenza l’integrazione sinaptica e le oscillazioni di rete nelle cellule eccitabili. Alterazioni della funzione o dell’espressione di HCN2 sono state associate a disturbi dell’eccitabilità, inclusi epilessia e fenotipi di dolore neuropatico, a supporto della sua utilità come bersaglio meccanicistico nella ricerca sui canali ionici e in neurofisiologia.
HCN2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HCN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HCN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HCN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HCN2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.