Hbb-bh1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420804

Panoramica

Hbb-bh1 codifica una subunità globinica β‑like embrionale che contribuisce all’assemblaggio dell’emoglobina e al trasporto di ossigeno nelle prime fasi dello sviluppo del topo. La sua espressione è regolata in modo dipendente dallo stadio di sviluppo all’interno del cluster genico della β‑globina ed è coordinata con i programmi di differenziamento eritroide controllati da regolatori trascrizionali ed epigenetici. Hbb-bh1 partecipa al bilanciamento eme–globina e all’omeostasi redox negli eritrociti primitivi, collegandosi a vie che influenzano la maturazione eritrocitaria e le risposte allo stress ossidativo. La disregolazione dello switching dei geni delle globine e della composizione dell’emoglobina è rilevante per modellare le emoglobinopatie e per studiare i meccanismi che determinano la specificazione della linea eritroide.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hbb-bh1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hbb-bh1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hbb-bh1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hbb-bh1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hbb-bh1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hbb-bh1 per lo studio della segnalazione di Hbb-bh1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hbb-bh1 critici per la funzione di Hbb-bh1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hbb-bh1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hbb-bh1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hbb-bh1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hbb-bh1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hbb-bh1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hbb-bh1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hbb-bh1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hbb-bh1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.