HAS2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420798-LAC

Il gene Has2 del topo codifica la ialuronano sintasi 2 (HAS2), una glicosiltransferasi associata alla membrana che polimerizza l’ialuronano sulla membrana plasmatica e contribuisce all’assemblaggio della matrice pericellulare. La produzione di ialuronano mediata da HAS2 influenza il rimodellamento della matrice extracellulare, l’adesione e la migrazione cellulare, nonché la meccanotrasduzione attraverso vie di segnalazione dipendenti da CD44 e RHAMM, incidendo su processi quali la transizione epitelio-mesenchimale e le risposte alle ferite. La regolazione di Has2 si interseca con le vie di segnalazione di TGF-β, ERK/MAPK e con quelle infiammatorie, che modulano la deposizione della matrice e l’architettura tissutale. Una disregolazione delle dinamiche HAS2/ialuronano è spesso studiata nella fibrosi, nel rimodellamento vascolare e nella biologia del microambiente tumorale, come determinante dell’organizzazione dello stroma e della motilità cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale HAS2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Has2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HAS2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Has2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HAS2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Has2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.