Partículas Lentivirales de Activación (m) HAS2: sc-420798-LAC

Mouse Has2 codifica la hialuronano sintasa 2 (HAS2), una glicosiltransferasa asociada a la membrana que polimeriza hialuronano en la membrana plasmática y contribuye al ensamblaje de la matriz pericelular. La producción de hialuronano impulsada por HAS2 influye en la remodelación de la matriz extracelular, la adhesión y migración celular, y la mecanotransducción mediante señalización dependiente de CD44 y RHAMM, afectando procesos como la transición epitelio-mesénquima y las respuestas a heridas. La regulación de Has2 se entrecruza con las vías de señalización de TGF-β, ERK/MAPK y la inflamación, que ajustan el depósito de matriz y la arquitectura tisular. La desregulación de la dinámica HAS2/hialuronano se investiga con frecuencia en fibrosis, remodelado vascular y biología del microambiente tumoral como determinante de la organización del estroma y la motilidad celular.

Las partículas de activación lentiviral HAS2 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Has2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HAS2 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Has2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HAS2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Has2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.