HAS2 Plasmide Double Nickase (m): sc-420798-NIC

Il gene Has2 del topo codifica la ialuronano sintasi 2 (HAS2), una glicosiltransferasi associata alla membrana che polimerizza l’ialuronano a livello della membrana plasmatica e lo esporta nella matrice extracellulare. La produzione di ialuronano mediata da HAS2 regola l’assemblaggio della matrice pericellulare, l’idratazione dei tessuti e la segnalazione cellula–matrice che influenza adesione, migrazione e proliferazione attraverso vie che coinvolgono CD44 e RHAMM, oltre al rimodellamento del citoscheletro. L’attività di Has2 è strettamente legata alla morfogenesi dello sviluppo, alla riparazione delle ferite, alla segnalazione infiammatoria e all’attivazione dei fibroblasti; un’omeostasi alterata dell’ialuronano è implicata in fibrosi, rimodellamento vascolare e biologia dello stroma associato ai tumori. In quanto determinante centrale della meccanica della matrice extracellulare e della disponibilità dei fattori di crescita, Has2 è spesso studiato in contesti di transizione epitelio–mesenchimale, angiogenesi e traffico delle cellule immunitarie.

HAS2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Has2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Has2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Has2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Has2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.