HAS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401951-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HAS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HAS1 Double Nickase Plasmid (h) e il HAS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HAS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HAS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401951-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HAS1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401951-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HAS1 codifica la ialuronano sintasi 1, un enzima di membrana plasmatica che polimerizza l’ialuronano, un glicosaminoglicano chiave della matrice extracellulare che regola l’idratazione dei tessuti, la viscoelasticità e l’organizzazione della matrice pericellulare. Controllando la produzione di ialuronano, HAS1 influenza l’adesione e la migrazione cellulare, nonché la segnalazione infiammatoria attraverso interazioni ialuronano–recettore, come le vie legate a CD44 e RHAMM. Un’espressione alterata di HAS1 o l’accumulo di ialuronano sono stati associati al rimodellamento dello stroma e a microambienti immunitari deregolati in diversi contesti patologici, rendendolo rilevante per studi su fibrosi, interazioni tumore–stroma e infiammazione cronica. Nei modelli cellulari, la perturbazione di HAS1 consente di analizzare in modo meccanicistico le dinamiche della matrice extracellulare e gli output di segnalazione dipendenti dall’ialuronano.
HAS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HAS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HAS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HAS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HAS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.