Plasmide CRISPR d'Activation (h) HAS1: sc-401951-ACT

Le gène humain **HAS1** code la **hyaluronane synthase 1**, une enzyme de la membrane plasmique qui polymérise l’**hyaluronane (HA)**, un glycosaminoglycane majeur de la matrice extracellulaire. En contrôlant l’abondance et le poids moléculaire de l’HA, HAS1 influence l’organisation de la matrice péricellulaire, l’adhérence et la motilité cellulaires, ainsi que la signalisation médiée par les récepteurs **CD44** et **RHAMM**. Le remodelage de l’HA dépendant de HAS1 s’entrecroise avec la signalisation inflammatoire, les réponses aux lésions et les interactions stroma–épithélium qui façonnent l’homéostasie tissulaire. Une synthèse d’HA dérégulée et des profils d’expression de HAS1 altérés ont été associés à des microenvironnements fibreux et au remodelage de la matrice associé aux tumeurs, étayant des études mécanistiques en biologie du cancer et de l’inflammation.

HAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HAS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HAS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HAS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HAS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HAS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HAS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HAS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HAS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.