Plasmide CRISPR d'Activation (h) Haptoglobin: sc-401468-ACT

HP code pour l’haptoglobine, une glycoprotéine sécrétée de phase aiguë qui se lie à l’hémoglobine libre avec une forte affinité afin de prévenir les dommages oxydatifs induits par l’hème et de conserver le fer après une hémolyse intravasculaire. Le complexe haptoglobine–hémoglobine est éliminé principalement via des macrophages CD163-positifs, ce qui relie HP à la régulation de l’immunité innée, à la signalisation inflammatoire et à l’homéostasie rédox. Dans le cadre de la réponse de phase aiguë, l’expression de HP est modulée par des voies médiées par les cytokines, notamment IL-6/STAT3 et des programmes transcriptionnels associés qui coordonnent l’inflammation systémique. Des modifications de l’abondance de HP et des profils de ses glycoformes ont été associées à des états hémolytiques, à des troubles inflammatoires et à des phénotypes de maladies cardiométaboliques, soulignant sa pertinence pour des études mécanistiques de l’immunométabolisme et du stress oxydatif.

Haptoglobin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Haptoglobin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Haptoglobin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Haptoglobin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Haptoglobin dans les cellules tumorales présentant une expression de HP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.