HAPLN1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419816

Panoramica

Hapln1 codifica la link protein 1 dell’ialuronano e dei proteoglicani (HAPLN1), un componente della matrice extracellulare (ECM) che stabilizza gli aggregati ialuronano–proteoglicani e supporta l’organizzazione strutturale delle matrici pericellulari. Rafforzando le interazioni tra l’ialuronano e i proteoglicani a solfato di condroitina, HAPLN1 contribuisce all’integrità della cartilagine e dei tessuti connettivi e influenza l’adesione cellulare, la meccanotrasduzione e la segnalazione dipendente dalla matrice. La sua attività è strettamente legata ai processi di assemblaggio e rimodellamento della ECM, che intersecano vie coinvolte nello sviluppo dei tessuti, nell’infiammazione e nella fibrosi. Un’architettura della matrice associata a HAPLN1 deregolata è stata implicata in fenotipi degenerativi articolari e in alterazioni stromali più ampie, in grado di modulare la migrazione cellulare e l’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HAPLN1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hapln1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hapln1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hapln1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HAPLN1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hapln1 per lo studio della segnalazione di HAPLN1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hapln1 critici per la funzione di HAPLN1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hapln1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HAPLN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HAPLN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hapln1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HAPLN1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HAPLN1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hapln1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hapln1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.