HAI-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404011

Panoramica

SPINT1 codifica l’inibitore dell’attivatore del fattore di crescita degli epatociti di tipo 1 (HAI-1), un inibitore delle serin-proteasi di tipo Kunitz ancorato alla membrana che limita la proteolisi pericellulare sulle superfici epiteliali. HAI-1 regola l’attività e la maturazione di proteasi come la matriptasi (ST14) e l’epsina, contribuendo a modulare il rimodellamento della matrice extracellulare, l’integrità della barriera epiteliale e le cascate di segnalazione dei fattori di crescita, inclusa la via HGF/c-MET. Attraverso queste interazioni, SPINT1 contribuisce all’omeostasi epiteliale, alla riparazione delle ferite e al controllo della motilità cellulare e dei programmi legati all’invasione. Uno squilibrio nella regolazione di SPINT1/HAI-1 è stato associato ad alterazioni delle reti proteasiche osservate in patologie epiteliali, inclusi il danno infiammatorio e il rimodellamento associato al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HAI-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPINT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPINT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPINT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HAI-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPINT1 per lo studio della segnalazione di HAI-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPINT1 critici per la funzione di HAI-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPINT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HAI-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HAI-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPINT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HAI-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HAI-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPINT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPINT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.