GTSF1L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410333-ACT

GTSF1L (gametocyte-specific factor 1-like) codifica una piccola proteina legante l’RNA, arricchita nella linea germinale, che si ritiene partecipi alla regolazione genica post-trascrizionale. Sulla base dell’omologia con le proteine della famiglia GTSF, GTSF1L è associato a vie legate ai piRNA che contribuiscono a regolare gli elementi trasponibili e a sostenere l’integrità del genoma durante lo sviluppo delle cellule germinali. Questi processi si intrecciano con il silenziamento dell’RNA, la regolazione della cromatina e il mantenimento della stabilità epigenetica nei tessuti riproduttivi. La deregolazione dei programmi di difesa genomica della linea germinale e l’espressione aberrante di fattori germinali in contesti somatici sono spesso studiate come possibili contributori all’instabilità genomica e a pattern di espressione simili agli antigeni cancro/testicolo.

GTSF1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GTSF1L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GTSF1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GTSF1L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GTSF1L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GTSF1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GTSF1L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GTSF1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GTSF1L nelle cellule tumorali con espressione di GTSF1L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.