GTBP Plasmide Double Nickase (h): sc-404192-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GTBP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GTBP Double Nickase Plasmid (h) e il GTBP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MSH6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GTBP Antibody (E-8): sc-137015
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GTBP Plasmide Double Nickase (h) | sc-404192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GTBP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MSH6 codifica il fattore della riparazione degli appaiamenti errati del DNA GTBP, che forma il complesso MutSα con MSH2 per riconoscere i mismatch base–base e i piccoli loop di inserzione–delezione generati durante la replicazione e la ricombinazione del DNA. Una volta rilevata la lesione, MutSα coordina gli eventi di riparazione a valle tramite il reclutamento di MLH1–PMS2 e di fattori di processamento associati, contribuendo a mantenere la stabilità del genoma e a limitare l’accumulo di mutazioni. L’alterazione della riparazione dei mismatch dipendente da MSH6 contribuisce all’instabilità dei microsatelliti e aumenta la mutagenesi spontanea, collegando la disfunzione di GTBP alla predisposizione al cancro, sia ereditaria sia sporadica. In quanto componente centrale delle vie di riparazione del DNA e di fedeltà della replicazione, MSH6 è ampiamente studiato nei meccanismi di mutagenesi, tolleranza al danno del DNA e risposte dei checkpoint.
GTBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MSH6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MSH6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MSH6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MSH6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.