G_βL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425272

Panoramica

Mlst8 codifica la proteina GβL (mLST8), un componente centrale di entrambi i complessi mTORC1 e mTORC2, che stabilizza la chinasi mTOR e supporta l’assemblaggio dei complessi e la trasduzione del segnale. Attraverso questi complessi, GβL influenza il sensing di nutrienti e fattori di crescita, il controllo della traduzione, l’autofagia e la regolazione del citoscheletro, integrando a monte le vie PI3K–AKT e correlate. Nei modelli murini, la perturbazione di Mlst8 viene utilizzata per studiare come la segnalazione mTOR coordini crescita cellulare, metabolismo e risposte allo stress nei diversi tessuti e contesti di sviluppo. Un’attività deregolata della via mTOR è ampiamente implicata nella biologia delle malattie proliferative e metaboliche, rendendo Mlst8 un nodo utile per studi meccanicistici sulla dipendenza dalla via e sul rimodellamento delle reti di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GβL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mlst8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mlst8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mlst8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GβL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mlst8 per lo studio della segnalazione di GβL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mlst8 critici per la funzione di GβL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mlst8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GβL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GβL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mlst8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GβL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GβL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mlst8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mlst8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.