Gα q Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420601-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Gα q Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Gα q CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Gα q CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Gα q CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Gnaq. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Gα q Antibody (10): sc-136181
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Gα q Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-420601-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Gα q Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-420601-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Gnaq codifica la subunità αq (Gαq) delle proteine G eterotrimeriche, un trasduttore chiave dei segnali provenienti da molti recettori accoppiati a proteine G (GPCR) verso l’attivazione a valle della fosfolipasi Cβ. L’idrolisi di PIP2 mediata da Gαq genera IP3 e DAG, favorendo la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare, la segnalazione della protein chinasi C e effetti più ampi sui programmi trascrizionali dipendenti da MAPK/ERK. Nelle cellule e nei tessuti di topo, l’attività di Gαq contribuisce a coordinare processi quali la contrazione della muscolatura liscia, la secrezione e l’eccitabilità neuronale attraverso reti di segnalazione GPCR–Ca2+. Una segnalazione GNAQ/Gαq deregolata è stata collegata in letteratura a contesti di segnalazione proliferativa e infiammatoria anomali ed è spesso studiata per i suoi ruoli nella regolazione vascolare e immunitaria, nonché nel crosstalk con vie oncogeniche.
Gα q Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gnaq senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Gα q Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gnaq nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gnaq, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Gα q. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gnaq nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Gα q nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Gα q nelle cellule tumorali con espressione di Gnaq silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.