Plasmide CRISPR/Cas9 KO G_{α i-2} (h): sc-400568

Présentation

GNAI2 code pour la sous-unité alpha inhibitrice de la protéine G humaine Gα i-2, un transducteur central de la signalisation des GPCR qui supprime l’activité de l’adénylate cyclase afin de réduire l’AMPc intracellulaire et module les réponses en aval liées à la PKA et aux MAPK. Via son couplage à divers récepteurs, Gα i-2 influence la signalisation calcique, la régulation des canaux ioniques, la chimiotaxie et le remodelage du cytosquelette, façonnant les programmes de migration cellulaire et d’activation des cellules immunitaires. Une signalisation GNAI2 altérée a été associée à une dérégulation des voies inflammatoires et à une signalisation proliférative aberrante observées dans de multiples contextes pathologiques, notamment les cancers et les troubles liés à l’immunité. Ces propriétés font de GNAI2 un nœud utile pour disséquer l’architecture des voies GPCR, la dynamique des seconds messagers et la plasticité de signalisation dépendante du contexte dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα i-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GNAI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GNAI2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GNAI2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gα i-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GNAI2 pour l'étude de la signalisation de Gα i-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GNAI2 essentiels à la fonction de Gα i-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GNAI2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Gα i-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Gα i-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GNAI2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Gα i-2 plasmide HDR (h) et le Gα i-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GNAI2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GNAI2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.