GSTP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402084-NIC

GSTP1 codifica la glutathione S-transferasi pi 1, un enzima citosolico di detossificazione di fase II che catalizza la coniugazione del glutatione a composti elettrofili, sostenendo l’omeostasi redox e la difesa cellulare contro lo stress ossidativo. GSTP1 partecipa al metabolismo degli xenobiotici e modula la segnalazione attivata dallo stress, inclusa la regolazione delle vie MAPK come JNK tramite interazioni proteina–proteina. Alterazioni dell’espressione di GSTP1 o la metilazione del suo promotore sono state associate a cambiamenti della capacità antiossidante e delle risposte cellulari allo stress in molteplici contesti rilevanti per il cancro, dove spesso viene studiato come marcatore dello stato di detossificazione. Queste funzioni rendono GSTP1 un nodo utile per indagare lo stress metabolico, i meccanismi di risposta ai farmaci e le reti di segnalazione regolate dal redox nelle cellule umane.

GSTP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSTP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSTP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSTP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSTP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.