GSTM4 Plasmide Double Nickase (h): sc-405305-NIC

GSTM4 codifica una glutatione S-transferasi della classe Mu che catalizza la coniugazione del glutatione ridotto con composti elettrofili, supportando la detossificazione di fase II e l’omeostasi redox. Metabolizzando prodotti della perossidazione lipidica e intermedi xenobiotici, GSTM4 contribuisce alla difesa cellulare contro lo stress ossidativo e chimico e aiuta a regolare le specie reattive dell’ossigeno intracellulari. La sua attività si integra con il metabolismo del glutatione e con programmi più ampi di risposta antiossidante che influenzano la segnalazione, la funzione mitocondriale e la sopravvivenza cellulare. Alterazioni dell’espressione o della funzione di GSTM4 sono state associate in letteratura a variabilità nella gestione degli xenobiotici e nella tolleranza allo stress, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della risposta ai tossici e del rimodellamento metabolico associato al cancro.

GSTM4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSTM4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSTM4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSTM4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSTM4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.