Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GSK3 beta Plasmide Double Nickase (m): sc-425249-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GSK3 beta Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GSK3 beta Double Nickase Plasmid (m) e il GSK3 beta Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Gsk3b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GSK3 beta Antibody (E-11): sc-377213
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GSK3 beta Plasmide Double Nickase (m) | sc-425249-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Gsk3b** codifica la glicogeno sintasi chinasi 3 beta (GSK3β), una chinasi serina/treonina che integra segnali che controllano il metabolismo del glicogeno, la progressione del ciclo cellulare e l’apoptosi. GSK3β è un nodo centrale della segnalazione Wnt/β-catenina attraverso una regolazione della stabilità della β-catenina dipendente dalla fosforilazione, e interagisce anche con PI3K–AKT, la segnalazione insulinica e vie infiammatorie come NF-κB. Tramite la modulazione di fattori di trascrizione e regolatori del citoscheletro, GSK3β influenza la polarità neuronale, la plasticità sinaptica e i programmi di differenziamento. Un’attività di GSK3β deregolata è stata collegata ad alterazioni della patterning dello sviluppo, disfunzioni metaboliche, fenotipi neurodegenerativi e contesti di segnalazione oncogenica, rendendola un bersaglio frequente per studi meccanicistici delle vie di segnalazione.
GSK3 beta Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Gsk3b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Gsk3b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Gsk3b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Gsk3b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.