Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) GSK-3α: sc-400518-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GSK-3α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GSK-3α Double Nickase (h) et le plasmide GSK-3α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GSK3A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GSK-3α Antibody (H-12): sc-5264
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GSK-3α | sc-400518-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GSK-3α | sc-400518-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GSK3A code la glycogène synthase kinase-3 alpha (GSK-3α), une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui intègre les signaux des voies Wnt/β-caténine, PI3K–AKT et de l'insuline afin de réguler le métabolisme du glycogène, la progression du cycle cellulaire et l'apoptose. En phosphorylant des substrats tels que la β-caténine ainsi que de multiples régulateurs transcriptionnels, GSK-3α influence des programmes d'expression génique qui contrôlent la différenciation et les réponses cellulaires au stress. Une activité de GSK-3α dérégulée et la signalisation en aval ont été associées à des altérations de la prolifération, de l'homéostasie métabolique et de la signalisation inflammatoire dans divers contextes pertinents pour la maladie. En tant que paralogue de GSK3B, GSK3A est fréquemment étudié afin de préciser les fonctions spécifiques à chaque isoforme au sein des réseaux de signalisation et les mécanismes compensatoires.
GSK-3α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSK3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSK3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSK3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSK3A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.