GSC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420701
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GSC Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GSC, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GSC Antibody (L-36): sc-81964
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GSC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420701 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene Gsc del topo codifica il fattore di trascrizione omeobox GSC, un regolatore conservato della patterning embrionale e della morfogenesi tissutale. GSC agisce a valle di importanti segnali di sviluppo, inclusi i pathway TGF-β/BMP e Wnt, coordinando programmi di espressione genica che controllano i movimenti della gastrulazione, la specificazione dell’asse e lo sviluppo craniofacciale. Un’alterata regolazione delle reti trascrizionali omeobox è ampiamente rilevante sia per le malformazioni congenite sia per contesti in cui i programmi di sviluppo vengono riattivati in modelli di malattia. Di conseguenza, Gsc è frequentemente studiato nei sistemi murini in analisi del controllo trascrizionale, dell’impegno di linea e dei circuiti di regolazione genica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GSC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gsc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gsc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gsc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GSC.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gsc per lo studio della segnalazione di GSC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Gsc critici per la funzione di GSC
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gsc per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GSC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GSC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gsc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GSC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GSC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gsc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gsc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.