Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
GRPR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401637
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRPR Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GRPR, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRPR Antibody (D-1): sc-398549
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRPR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401637 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GRPR (recettore del peptide gastrin-releasing) è un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) a sette domini transmembrana che lega il peptide gastrin-releasing/ligandi di tipo bombesina per regolare la mobilizzazione del calcio intracellulare e la segnalazione a valle attraverso le cascate PLC, PKC e MAPK. L’attività di GRPR influenza la proliferazione cellulare, la secrezione e i processi neuromodulatori, collegandolo a una regolazione dipendente dal contesto della fisiologia epiteliale e neuronale. Un’alterata espressione o segnalazione di GRPR è stata associata a reti di segnalazione oncogeniche e a una disregolazione delle vie neuroendocrine e gastrointestinali in modelli rilevanti per la patologia. In quanto recettore di membrana con una responsività definita ai ligandi, GRPR rappresenta un nodo facilmente studiabile per analizzare la segnalazione guidata dai GPCR, il traffico recettoriale e gli output trascrizionali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRPR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRPR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRPR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRPR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRPR.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRPR per lo studio della segnalazione di GRPR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GRPR critici per la funzione di GRPR
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRPR per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GRPR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRPR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRPR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GRPR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRPR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRPR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRPR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.