GRP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432553

Panoramica

Il gene murino **Grp** codifica per il peptide di rilascio della gastrina (**GRP**), un neuropeptide che segnala principalmente attraverso il recettore accoppiato a proteina G **GRPR** per regolare il flusso intracellulare di Ca²⁺ e le vie di segnalazione a valle **MAPK/ERK** e **PLC**. Il GRP contribuisce alla comunicazione neuronale, alla secrezione neuroendocrina e all’attività della muscolatura liscia e può influenzare i circuiti circadiani e quelli responsivi allo stress a seconda del contesto tissutale. Nei sistemi immunitario e gastrointestinale, la segnalazione mediata da GRP è stata associata alla modulazione dei programmi infiammatori e della fisiologia epiteliale. Un’attività deregolata dell’asse GRP/GRPR è frequentemente indagata in modelli di proliferazione cellulare aberrante, neuroinfiammazione e reti di segnalazione associate ai tumori, a supporto della sua rilevanza per la ricerca meccanicistica sulle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Grp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Grp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Grp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Grp per lo studio della segnalazione di GRP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Grp critici per la funzione di GRP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Grp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Grp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GRP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Grp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Grp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.