GRP 75 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400471-LAC

HSPA9 codifica GRP75 (mortalin), uno chaperone HSP70 associato ai mitocondri che supporta l’importazione e il ripiegamento delle proteine e la proteostasi all’interno della matrice mitocondriale e nei siti di contatto tra mitocondri e reticolo endoplasmatico (RE). GRP75 contribuisce alla biogenesi mitocondriale e al controllo di qualità, integra le risposte allo stress con il metabolismo energetico e modula apoptosi e senescenza tramite interazioni con vie quali la segnalazione di p53 e le reti dello stress ossidativo. Alterazioni della funzione di HSPA9/GRP75 sono state collegate a fenotipi di disfunzione mitocondriale e sono oggetto di studio in contesti che includono neurodegenerazione, sindromi di insufficienza ematopoietica e metabolismo delle cellule tumorali. In quanto regolatore centrale della resilienza cellulare allo stress, GRP75 è spesso investigata per i suoi ruoli nella dinamica mitocondriale, nella gestione delle specie reattive dell’ossigeno e nella segnalazione delle membrane associate ai mitocondri.

Le particelle di attivazione lentivirale GRP 75 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HSPA9 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GRP 75 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HSPA9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GRP 75. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HSPA9 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.