Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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GRP 75 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420983
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRP 75 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GRP 75, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRP 75 Antibody (D-9): sc-133137
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRP 75 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420983 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Hspa9 codifica GRP75 (mortalin), uno chaperone mitocondriale della famiglia HSP70 che supporta l’importazione e il ripiegamento delle proteine, nonché la proteostasi all’interno della matrice mitocondriale. GRP75 partecipa al controllo qualità mitocondriale, alla regolazione della fosforilazione ossidativa e al mantenimento dei processi legati ai cluster ferro–zolfo e all’eme, che influenzano l’omeostasi redox. Contribuisce inoltre alla comunicazione tra mitocondri e reticolo endoplasmatico (ER) tramite reti di chaperoni che modulano la gestione del calcio e la segnalazione di stress. La deregolazione di Hspa9/GRP75 è stata associata a disfunzione mitocondriale e a fenotipi di stress cellulare rilevanti per la neurodegenerazione, la disfunzione cardiometabolica e il rimodellamento delle vie bioenergetiche associato alla trasformazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRP 75 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hspa9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hspa9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hspa9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRP 75.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hspa9 per lo studio della segnalazione di GRP 75, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Hspa9 critici per la funzione di GRP 75
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hspa9 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GRP 75 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GRP 75 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hspa9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GRP 75 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GRP 75 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hspa9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hspa9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.